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原代培養(yǎng)及其操作步驟有幾步?

更新時間:2022-06-09  |  點擊率:664

細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞在體外的培養(yǎng)技術(shù),即在無菌條件下,從機體中取出組織或細(xì)胞,模擬機體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件,讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存、生長和繁殖的方法。通過細(xì)胞培養(yǎng)我們可以獲得大量的、性狀相同的細(xì)胞,以便于研究細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及功能和機制。

細(xì)胞真的很脆弱,就像小嬰兒一樣,需要你無微不至的關(guān)懷。

原代分離細(xì)胞培養(yǎng)是指從供體內(nèi)取出組織后,經(jīng)機械以及消化分離成單個細(xì)胞或單一型細(xì)胞群,使之在體外模擬人體生理環(huán)境,在無菌、適當(dāng)溫度和一定的營養(yǎng)條件下,生存、生長和繁殖。原代培養(yǎng)細(xì)胞常有不同的細(xì)胞成分,生長緩慢,但是更能代表所來源的組織細(xì)胞類型和表達組織的特異性特征。利用原代細(xì)胞培養(yǎng)做各種實驗,如藥物測試、細(xì)胞分化及病毒學(xué)方面的試驗效果很好。其操作步驟如下。

1、剪切組織:先將所取得的組織,用D-Hanks或Hanks液清洗,以去除表面血污,并用手術(shù)鑷去除黏附的結(jié)締組織等非培養(yǎng)所需組織。再次清洗后,用手術(shù)刀將組織切成若干小塊,移入青霉素小瓶或小燒杯中,加入適量緩沖液,用彎頭眼科剪,反復(fù)剪切組織,直到組織成糊狀,約1mm3大小。靜置片刻后,用吸管吸去上層液體,加入適當(dāng)?shù)木彌_液再清洗一次。

2、消化分離:消化分離的目的是將細(xì)小的組織塊消化分離成細(xì)胞團或分散的單個細(xì)胞,以利于進一步的培養(yǎng),常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。

3、培養(yǎng):細(xì)胞懸液用計數(shù)板進行細(xì)胞計數(shù)。用培養(yǎng)液將細(xì)胞數(shù)調(diào)整為(2~5)×105 cells/ml,或?qū)嶒炈杳芏?,分裝于培養(yǎng)瓶中,使細(xì)胞懸液的量以覆蓋后略高于培養(yǎng)瓶底部為宜。置CO2培養(yǎng)箱內(nèi),5%CO2,37℃靜置培養(yǎng)。一般3~5d,原代培養(yǎng)細(xì)胞可以黏附于瓶壁,并伸展開始生長,可補加原培養(yǎng)液量1/2的新培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)2~3d后換液,一般7~14d可以長滿瓶壁,進行傳代。

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